土壤酶的测定是进行土壤酶学研究的基础。目前，土壤酶活性的测定方法较多，但并没有统一方法，其中常见的是传统的分光光度法和新型的荧光分析法。分光光度法也称比色法，其基本原理是酶与底物混合经培养后产生某种带颜色的生成物，可在某一吸收波长下产生特征性波峰，再用分光光度计测定设定的标准物及生成物的吸光值，由此确定酶活性的量。20世纪90年代，国际上发展起了酶活性测量的新方法－荧光分析法，其主要原理是以萤光团标记底物作为探针，通过荧光强度的变化来反映酶活性。传统的比色法测定一般首先是根据所测酶的种类制作对应的标准曲线，然后对土样进行处理后在同一波长下测其吸光值，再利用标准曲线确定土样中的酶活性。这种方法已得到普遍认可，长期以来被国内外学者采纳。荧光分析法测定步骤与比色法基本一致，但与传统方法相比较，荧光分析技术具有灵敏度高耗时短等优点，同时它也存在分析成本较高、底物难溶解等缺点。